Herstellung von Acrylamid-Lösung zum Gießen von Gelen

Standardrezeptur für die Herstellung von Gelen für die SDS-PAGE

(modifiziert nach Laemmli2))

Lösung aus Acrylamid und N, N'-Methylenbisycrylamid 

Kat.-Nr. Zusammensetzung
Acrylamide:Bis
% C % T Anwendungen
10679 19:1 5,0 40 DNA-Sequenzierung
10680 29:1 3,3 40 IEF, SDS-PAGE
10681 37,5:1 2,6 40 SDS-PAGE
10687 29:1 3,3 30 IEF, SDS-PAGE
10688 37,5:1 2,6 30 SDS-PAGE

Lagerung: 2-8 °C

 

SERVA Acrylamid/Bis-Lösungen sind für alle PAGE-Techniken geeignet.
Die Acrylamid/Bis-Lösung 29:1 (Kat.-Nr. 10679) eignet sich auch für die Herstellung von Gelen nach Schägger und Jagow (Anal. Biochem., (1987): 166, 368-379 2).

Die Menge an Gellösung (20 ml) ist ausreichend für 2 Vertikalminigele (100 mm x 80 mm x 1,4 mm).

Produkt
Endgültige Gelkonzentration (% T)
Trenngel (10 ml) 
  
 Sammelgel 
(10 ml)
7 %
10 %  
12,5 %  
15 %
5 %
30 %*
40 %*
30 % 
40 % 
30 % 
40 % 
30 % 
40 % 
30 % 
40 %
Acrylamid-Bis
Lsg. %*
2,33 ml
1,75 ml
3,33 ml
2,50 ml
4,17 ml
3,13 ml
5,00 ml 
3,75 ml 
1,67 ml 
1,25 ml
Trenngel-
puffer 4 x
2,50 ml
2,50 ml
2,50 ml
2,50 ml
2,50 ml 
2,50 ml 
2,50 ml
2,50 ml
— 
— 
Sammelgel-
puffer 4 x
— 
— 
—  
—  
—  
—  
—  
—  
2,50 ml
2,50 ml
dest. H2O
5,07 ml
5,65 ml
4,03 ml
4,90 ml
3,29 ml
4,27 ml
2,46 ml
3,65 ml
5,79 ml
6,15 ml
SDS, 10 % Lsg.
(Kat.-Nr. 20763)
0,1 ml
0,1 ml
 0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
TEMED
(Kat.-Nr. 35925)
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
0,015 ml
APS, 10 % Lsg.
(Kat.-Nr. 13375)
0,03 ml
 0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
0,03 ml
 
*Die Zusammensetzung der Acrylamid/Bis-Lösung (Anteile Acrylamid:Crosslinker) richtet sich nach der Anwendung. Für Standard-SDS-PAGE empfehlen wir die Acrylamid/Bis-Lösung 29:1 (Kat.-Nr. 10680) oder 37,5:1 (Kat.-Nr. 10681).

 

Benötigte Puffer

Trenngel-Puffer, 4x (1,5 M Tris/HCI pH 8,8)

• 18,2 g Tris (Kat.-Nr. 37190) in Wasser (bidest.) lösen
• pH 8,8 einstellen (mit ca. 2,8 ml HCl, 32 %)


Sammelgel-Puffer, 4 x (0,5 M Tris/HCI pH 6,8)

• 6,1 g Tris (Kat.-Nr. 37190) in Wasser (bidest.) lösen
• pH 6,8 einstellen (mit ca. 4,4 ml HCl, 32 %)

 

Durchführung

  1. Acrylamid/Bis-Lösung, Puffer und Wasser getrennt für Sammel- und Tenngel in geeigneten Gefäßen, z. B. 30 ml-Saugflaschen ansetzen.
  2. Die Lösungen kurz entgasen (1-3 min im Vakuum).
  3. Zur Trenngel-Lösung 10 % SDS in Wasser zugeben, TEMED und Lösung von 10 % Ammoniumpersulfat (APS) durch leichtes Schwenken des Gefäßes untermischen, ohne Luft in die Lösung zu ziehen.
  4. Gießen des Trenngels: In das Slabgel-Sandwich soviel Gel-Lösung fällen, daß die Trennstrecke des Sammelgels das 1,5-fache der Taschentiefe des zu verwendenden Kamms betragen wird. Sofort mit Isopropanol (0,1 ml) überschichten, polymerisieren lassen (ca. 15 - 20 min).
  5. Zur Sammelgel-Lösung 10 % SDS in Wasser zugeben, TEMED und Lösung von 10 % Ammoniumpersulfat (APS) durch leichtes Schwenken des Gefäßes untermischen, ohne Luft in die Lösung zu ziehen.
  6. Gießen des Sammelgels: Slabgel-Sandwich bis zum Rand mit Sammelgel auffüllen, Kamm einstecken und polymerisieren lassen.
Literatur:
1) Schägger H. & von Jagow, U. (1987) Anal. Biochem. 166, 368-379 2.
2) Laemmli, U.K. (1970) Nature 227, 680-685.

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