His-Tag-Aufreinigung
Metallchelatchromatographie (Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC) ist eine Affinitätschromatographie, die vor allem bei der Isolierung heterolog exprimierter Proteine sehr häufig angewendet wird. Diese Methode beruht darauf, dass Proteinmotive mit mehreren Histidin- oder Cystein-Resten (in geringerem Maße auch Tryptophan-Reste) in geeigneter Anordnung an Säulen binden, die kovalent Metallchelate gebunden haben. Die Metall-Ionen werden durch eine chemische Reaktion an die Agarosekügelchen gebunden, die dadurch einen Aktivierungsgrad erhalten.
SERVA Nickel-NTA-Agaroseharz besteht aus quervernetzter Agarose, die mit Nitrilotriessigsäure derivatisiert und mit divalenten Nickel-Ionen beladen wurde. Die vier Metall-Bindungsstellen der Chelatverbindung ermöglichen eine hohe Proteinbindung und zeigen minimales Ausbluten des Metalls. Daher ist dieses Harz ideal für Aufreinigungen unter reduzierenden Bedingungen.
Ni-Extrachel Agarose Resin hat einen Polychelator-Liganden kovalent gekoppelt an ein hochquervernetztes Agaroseharz und ist mit Nickel beladen. Das Harz ist stabil gegen EDTA, DTT und andere Chemikalien, die mit standard Ni-NTA or -IDA-Harzen zum Verlust der Nickel-Beladung führen. Die Spezifität und Stabilität ermöglicht eine Ein-Schritt-Reinigung ohne eine Vorbehandlung für das Entfernen von Nickel Stripping Reagenzien.
SERVA IDA-Agaroseharze haben Imminodiessigsäure-Gruppen kovalent an
quervernetzte Agarosekügelchen gekoppelt.
Das Harz ist mit einem
divalenten Metall-Ion beladen (Ni2+, Co2+ ). IDA hat für
Metall-Ionen drei Bindungsstellen anstatt vier wie NTA. Deshalb können
IDA-Agaroseharze einfacher regeneriert werden und an die Matrix gebundene
Proteine sind schonender und mit einer geringeren Imidazol-Konzentration zu
eluieren.
Die Wahl des Harzes hängt davon ab, ob eine höhere
Bindungskapazität oder Selektivität für die Aufreinigung wichtig ist und ob
das Protein einfach oder schwierig von anderen Proteinen zu trennen ist.
Die
innovativen Ni-IMAC Mini-Kits kombinieren die Qualität der
Aufreinigung, die von einer Gravitationssäule zu erwarten ist, mit der
Geschwindigkeit und einfachen Handhabung von Zentrifugationssäulen.
Für
die Anwendung in der FPLC sind die Super Ni-NTA und Co-NTA Agaroseharze
bestens geeignet.
SERVAs Standard und Superflow Agaroseharze in
verschiedenen Formaten (lose, vorgepackte Säulen, Kits) und magnetische
Agarose Beads ermöglichen die Proteinaufreinigung im Labor- bis hin zum
Prozeßmaßstab.